一、原理

　　流感病毒顆粒表面的血凝素（HA）蛋白，具有識別并吸附于紅細胞表面受體的結(jié)構(gòu)，HA試驗由此得名。HA蛋白的抗體與受體的特異性結(jié)合能夠干擾HA蛋白與紅細胞受體的結(jié)合從而出現(xiàn)抑制現(xiàn)象。

　　二、應(yīng)用

　　該試驗是目前WHO進行全球流感監(jiān)測所普遍采用的試驗方法�？捎糜诹鞲胁《痉蛛x株HA亞型的鑒定，也可用來檢測禽血清中是否有與抗原亞型一致的感染或免疫抗體。

　　三、缺點

　　只有當抗原和抗體HA亞型相一致時才能出現(xiàn)HI現(xiàn)象，各亞型間無明顯交叉反應(yīng)；除雞血清以外，用雞紅細胞檢測哺乳動物和水禽的血清時需要除去存在于血清中的非特異凝集素；需要在每次試驗時進行抗原標準化；需要正確判讀的技能。

　　四、試驗步驟

　　1阿氏（Alsevers）液配制

　　稱量葡萄糖2.05g、檸檬酸鈉0.8g、檸檬酸0.055g、氯化鈉0.42g，加蒸餾水至100mL，散熱溶解后調(diào)pH值至6.1，

　　69kPa 15min高壓滅菌，4℃保存?zhèn)溆�。�?.8%枸櫞酸鈉（3.8g枸櫞酸鈉，100ml超純水），101 kPa,20min高壓滅菌，4℃保存?zhèn)溆?保存期1個月）。

　　210%和1%雞紅細胞液的制備

　　2.1采血

　　用注射器吸取阿氏液約1mL（3.8%枸櫞酸鈉），取至少2只SPF雞（如果沒有SPF雞，可用常規(guī)試驗證明體內(nèi)無禽流感和新城疫抗體的雞），采血約2～4mL，與阿氏液混合（3.8%枸櫞酸鈉），放入裝10mL阿氏液（生理鹽水）的離心管中混勻。

　　2.2洗滌雞紅細胞

　　將離心管中的血液經(jīng)1500～1800 r/min離心8分鐘，棄上清液，沉淀物加入阿氏液（生理鹽水），輕輕混合，再經(jīng)1500～1800 r/min離心8分鐘，用吸管移去上清液及沉淀紅細胞上層的白細胞薄膜，再重復(fù)2次以上過程后，加入阿氏液20 mL（生理鹽水），輕輕混合成紅細胞懸液，4℃保存?zhèn)溆茫�不超過5天。

　　2.310%雞紅細胞懸液

　　取阿氏液保存不超過5天的紅細胞，在錐形刻度離心管中離心1500～1800 r/min 8分鐘，棄去上清液，準確觀察刻度離心管中紅細胞體積(mL)，加入9倍體積(mL)的生理鹽水，用吸管反復(fù)吹吸使生理鹽水與紅細胞混合均勻。（此步

　　可省略，直接配制1%紅細胞）

　　2.41%雞紅細胞液

　　取混合均勻的10%雞紅細胞懸液1 mL，加入9 mL生理鹽水，混合均勻即可。（根據(jù)檢測血清的數(shù)量，估算一下需要的1%雞紅細胞量，可按0.3ml/每份血清）

　　3抗原血凝效價測定（HA試驗，微量法）

　　3.1在微量反應(yīng)板的1孔～12孔均加入25μl PBS（生理鹽水），換滴頭。

　　3.2吸取25μl抗原加入第l孔，混勻。

　　3.3從第1孔吸取25μl，病毒液加入第2孔，混勻后吸取25μl加入第3孔，如此進行倍比稀釋至第11孔，從第11孔吸取25μl棄之，換滴頭。

　　3.4每孔再加入25μl PBS（生理鹽水）。

　　3.5每孔均加入25μl體積分數(shù)為1%雞紅細胞懸液（將雞紅細胞懸液充分搖勻后加入）。

　　3.6振蕩混勻，在室溫（20～25℃）下靜置40min后觀察結(jié)果（如果環(huán)境溫度太高，可置4℃環(huán)境下反應(yīng)1小時）。對照孔紅細胞將呈明顯的鈕扣狀沉到孔底。

　　3.7結(jié)果判定將板傾斜，觀察血凝板，判讀結(jié)果。

　　能使紅細胞完全凝集（100%凝集，++++）的抗原最高稀釋度為該抗原的血凝效價，此效價為1個血凝單位（HAU）。注意對照孔應(yīng)呈現(xiàn)完全不凝集（-），否則此次檢驗無效。

　　4血凝抑制（HI）試驗（微量法）

　　4.1根據(jù)3的試驗結(jié)果配制4HAU的病毒抗原。以完全血凝的病毒最高稀釋倍數(shù)作為終點，終點稀釋倍數(shù)除以4即為含4HAU的抗原的稀釋倍數(shù)。例如，如果血凝的終點滴度為1:256，則4HAU抗原的稀釋倍數(shù)應(yīng)是1:64（256除以4）。

　　4.2在微量反應(yīng)板的1孔～11孔加入25μl PBS（生理鹽水），第12孔加入50μl PBS（生理鹽水）。

　　4.3吸取25μl血清加入第1孔內(nèi)，充分混勻后吸25μl于第2孔，依次倍比稀釋至第10孔，從第10孔吸取25μl棄去。

　　4.4 1孔～11孔均加入含4HAU抗原25μl，室溫（約20℃）靜置至少30min。

　　4.5每孔加入25μl 1%的雞紅細胞懸液混勻，輕輕混勻，靜置約40min（室溫約20℃，若環(huán)境溫度太高可置4℃條件下進行），對照紅細胞將呈現(xiàn)鈕扣狀沉于孔底。

　　4.6結(jié)果判定

　　試驗成立的條件：只有陰性對照孔血清滴度不大于21og2，陽性對照孔血清誤差不超過1個滴度，試驗結(jié)果才有效。

　　以完全抑制4HAU抗原的血清最高稀釋倍數(shù)作為HI滴度。

　　HI價小于或等于31og2判定HI試驗陰性；HI價大于或等于41og2為陽性。

　　五、HI試驗注意事項

　　1、合理選擇抗原和對照陽性血清。針對Re-4和Re-5株疫苗免疫采用相應(yīng)抗原和對照陽性血清。

　　同一亞型的禽流感病毒制成的抗原，如果毒株來源不同，則可能會存在抗原性差異，從而使檢測同一血清的結(jié)果有差別。一般來講，疫苗種毒株如果與抗原所用毒株相同時，則所測得的HI效價較高。

　　2、合理使用和保存抗原。反應(yīng)試劑要按規(guī)定保存和使用，凍干的試劑應(yīng)按照說明中規(guī)定的體積重新溶解并保存。要避免雜菌污染，因為污染所造成的非流感起源的凝集素也可與所有抗血清發(fā)生非特異反應(yīng)。為避免反復(fù)凍融和細菌污染，可以無菌操作將試劑分裝成小包裝。

　　3、反應(yīng)溫度不能太高。若在37℃（如溫箱）下進行，

　　血凝抑制實驗報告三隨著養(yǎng)殖業(yè)的飛速發(fā)展和廣大養(yǎng)殖戶科學(xué)意識的不斷提高，人們普遍認識到實驗室檢測技術(shù)在臨床應(yīng)用的重要性。下面簡單介紹一下雞新城疫微量血凝試驗和血凝抑制試驗的注意事項及操作方法。

　　應(yīng)用：

　　用于新城疫、產(chǎn)蛋下降綜合征和傳梁性支氣管炎等的母源抗體的檢測、雛雞首免日齡的確定、疫苗免疫后的免疫應(yīng)答的監(jiān)測、臨床雞病的鑒別診斷等。

　　下面以新城疫病毒為例，介紹血凝和血凝抑制試驗的方法：

　　注意事項：

　　一、樣本要具有代表性：所采樣本要能代表整體，通常采用四角加中間的隨機取樣法，并且確定適當?shù)臉悠窋?shù)量，一般1000只以下的雞群采樣率在2～5%；5000只以下1～2%；5000只以上0.5～1%。對產(chǎn)蛋期間的雞群可采雞蛋；對雛雞或青年雞，可采血。方法是：取青霉素小瓶，洗凈后用蒸餾水沖洗、控干水分，并注意不要用消毒劑，以免影響結(jié)果。每只雞采血量在1ml左右，最好不低于1ml，在室溫下靜置至血清自然析出。

　　二、四單位抗原的準確性：要獲得準確的監(jiān)測效果，先做紅血球的凝集試驗，即測得抗原的血凝價，爾后前移2孔作為四單位抗原的稀釋度。

　　三、紅血球洗脫的充分性：原則上，新城疫檢測所用的紅血球應(yīng)來源于非疫苗免疫過的健康公雞，但實際上卻多采用免疫過疫苗的健康公雞，有時甚至是病雞。因此，對紅血球的洗脫的次數(shù)要多、要充分，并注意轉(zhuǎn)速和時間，通常采用五次變速離心法：前四次為每分鐘1500轉(zhuǎn)，每次5分鐘，最后一次為每分鐘3000轉(zhuǎn)，持續(xù)7～8分鐘。另外，洗紅血球過程中，應(yīng)注意動作要輕，玻璃儀器之間盡量減少碰撞，以免造成紅血球破裂而影響結(jié)果。

　　四、結(jié)果判定的及時性：檢測中，每次試驗均應(yīng)設(shè)抗原與生理鹽水對照，加入紅血球后，每隔5分鐘觀察一次，一旦兩列對照孔圖像清晰地顯示出來時，應(yīng)立即對樣本進行結(jié)果判定，過早過晚都會影響判定結(jié)果的準確性。

　　血凝與血凝抑制試驗的操作方法

　　一、材料與儀器：

　　新城疫抗原、1%雞紅血球、抗凝劑、生理鹽水、被檢血清、離心機、吸管、滴管、洗耳球、燒杯、量筒、注射器、長針頭、96孔V型醫(yī)用血凝板、微量移液器、微量振蕩器、恒溫培養(yǎng)箱、冰箱等。

　　二、方法：

　　1%雞紅血球的'制備：

　　1.用長針刺入雞心臟或翅下靜脈，采血，采血量視用量而定，5%抗凝劑與全血的比例為1∶3～4。

　　2.洗血球：共洗4～5次，每次5～8分鐘，紅血球與生理鹽水的比例至少為1∶2～3。離心機轉(zhuǎn)速為每分鐘1500～3000轉(zhuǎn)，最后傾去上清。

　　3.吸紅血球泥1ml加生理鹽水99ml，配成1%紅血球備用。

　　三、血凝試驗：

　　1.血凝板上12個孔內(nèi)全部加入生理鹽水，每孔0.05ml，吸等量新城疫抗原于第一孔內(nèi)，混勻后吸出同量于第二孔內(nèi)混勻，以此類推稀釋至第11孔，并棄去0.05ml，留第12孔作為生理鹽水對照，然后全部孔內(nèi)加入1%雞紅血球。

　　2.將血凝板置于振蕩器上振蕩1～2分鐘，使材料充分混均，放入恒溫培養(yǎng)箱，每5分鐘觀察一次，至10～15分鐘取出，一般以生理鹽水對照孔的圖象清析地出現(xiàn)為準。

　　3.結(jié)果判定：紅血球在反應(yīng)板底部全部均勻鋪開為完全凝集（++++），在血凝板底部集為一小紅點為沉淀（－），如底部為一小紅點，四周為凝集的紅細胞，則為不完全凝集（++）。

　　4.出現(xiàn)完全凝集的抗原的最高稀釋度，即為該抗原的凝集價。

　　5.四單位抗原的制備：血凝試驗的結(jié)果如為28（256），則前移2孔即26（64），作為四單位抗原的稀釋度。即：63ml生理鹽水+1ml抗原即為四單位抗原。

　　四.血凝抑制試驗：

　　1.血凝板上1～11孔全部加入0.05ml的生理鹽水，于第一孔內(nèi)加入等量的被檢抗體，稀釋至第10孔，棄去0.05ml，再加入等量的4單位新城疫抗原至第11孔，第11孔為抗原對照，12孔為生理鹽水對照。在振蕩器上振蕩1～2分鐘，放置室溫約20分鐘，然后加入等量的1%雞紅血球，振蕩后放入恒溫培養(yǎng)箱大約10～15分鐘后進行結(jié)果判定。

　　2.結(jié)果：能完全抑制紅細胞凝集的被檢抗體的最高稀釋度為該被檢抗體的血凝抑制滴度。

　　注：1、HI價在23～24時免疫可產(chǎn)生良好的免疫應(yīng)答，如在疫區(qū)可提高到24～25免疫。

　　2、24～25

　　注：#為完全抑制，++為不完全抑制，－為不抑制。

實驗報告 14

　　調(diào)查目的：

　　在剛剛閉幕的中國共產(chǎn)黨第十八次全國代表大會上，胡錦濤對廣大青年學(xué)生提出了“以德樹人”的號召，號召廣大青年學(xué)子，注重自身德育培養(yǎng)，以更高的標準要求自己，自覺接受社會實踐。而當下，“樹新風(fēng)，自覺投身社會實踐。”的良好風(fēng)氣也正在大學(xué)校園中飄香。參加社會公益活動，作為當代大學(xué)生投身社會實踐的主要內(nèi)容和主要方式，一直受到大學(xué)生的歡迎和喜愛，學(xué)校也高度的支持和鼓勵。通過參加公益活動，一方面可以把學(xué)到的理論知識投身到社會實踐中去，為人民父母，為社會做貢獻;另一方面可以提升大學(xué)生對社會的認知能力，加深社會閱歷和社會責(zé)任感。

　　調(diào)查對象和方式：

　　通過采取問卷調(diào)查、隨機采訪和網(wǎng)上查找資料的方式，對廣西大學(xué)本部和廣西大學(xué)行健文理學(xué)院的大學(xué)生開展了此次調(diào)查。

　　調(diào)查內(nèi)容：

　　本次調(diào)查通過對大學(xué)生是否有過參加公益活動，參加公益活動的時間，最想?yún)⒓雍畏N公益活動，參加公益活動次數(shù)和主要活動形式，參加公益活動的感受及參加公益活動對自身的影響等問題進行展開。

　　調(diào)查結(jié)果：

　　從調(diào)查中發(fā)現(xiàn)，許多大學(xué)生都認為參加公益活動是一件非常有意的事情。通過參加公益活動，個人社會實踐能力、了解和提高社會(體驗閱歷)都有了很大的幫助。無償獻血、愛心助教、社會活動志愿者、敬老慰老等活動是大學(xué)生參與人數(shù)最多的。但因為公益活動的開展不具有定時、定點性的特點，所以不少大學(xué)生都表示愿意會經(jīng)常與公益組織聯(lián)系，組織身邊的同學(xué)多多參與到公益活動中來，擠出一點時間，奉獻自己的一份愛心，去回報社會。

　　調(diào)查報告顯示：92%的大學(xué)生都有參加過一次以上的公益活動的經(jīng)歷，在他們參與的公益活動中，無償獻血占48%，其次是社會活動志愿者占30%，愛心助教12%，，敬老慰老占10%;剩下的8%未參加過公益活動的同學(xué)，表示平時很少會了解和接觸公益活動的信息，但表示如果自己有合適的時間和喜歡的公益活動，會考慮參加。80%的大學(xué)生表示通過參加公益活動：自身對社會的.認識有了進一步的深入，就通過如何更好的展示自身素質(zhì)和才能來服務(wù)社會、服務(wù)群眾的問題有了深入的思考，同時，如何把自身所學(xué)到的專業(yè)知識應(yīng)用到各種活動中，也是值得思考的問題;參加活動的過程中，感受到了作為一名社會成員的責(zé)任，能夠盡自己的綿薄之力去幫助那些需要幫助的人，如老年人、殘疾人和兒童等，心靈上得到了較大的慰藉，正所謂“贈人玫瑰，手有余香�！�;20%的大學(xué)生表示，他們參加公益活動，多是為了陪伴同學(xué)或者打發(fā)時間，目的性很不明確，這樣一來，他們參加活動的效果就不明顯，收獲很少。95%的同學(xué)表示會利用周末或者其它空余的時間參加公益活動，除非是大型公益活動，否則很少會利用到學(xué)習(xí)時間，從而影響個人學(xué)業(yè);5%的同學(xué)表示，因為他們參加的公益活動多為大型社會活動的志愿者工作，所以經(jīng)常會擠占上課時間，對學(xué)習(xí)有較大的影響。98%的學(xué)生表示，公益活動是一種比較好的社會活動，值得參加;2%的學(xué)生表示，公益活動范圍太小，可參加可不參加。75%的學(xué)生表示對當前的公益活動性質(zhì)和活動內(nèi)容感到比較滿意，認可公益組織的策劃與安排;25%的同學(xué)表示，當前的公益活動形式和內(nèi)容還存在諸多的不完善，主要表現(xiàn)在：開展活動一次過，沒有后續(xù)性;幫扶性很小;組織結(jié)構(gòu)不夠完善等，有待改善。

　　另外，沒有同學(xué)表示不應(yīng)該開展和參加公益性活動，大家都認為，只要時間合適和活動內(nèi)容和質(zhì)量較好，在不影響學(xué)習(xí)時間的前提下，都會考慮是否參加。調(diào)查結(jié)果分析：

　　在調(diào)查中發(fā)現(xiàn)，大學(xué)生所選擇參加的公益活動，多為大中型、群體性較高、服務(wù)時間短的一類;以個體為主，長時間連續(xù)性、定點開展的一類較少。對于公益活動的組織者而言，如何將公益活動的開展，能與時代相掛鉤，改變傳統(tǒng)的內(nèi)容和形式，增加新意和符合當代大學(xué)生特點，是吸引更多大學(xué)生投身公益活動的關(guān)鍵所在。而對于大學(xué)生而言，要樹立科學(xué)的、高尚的公益服務(wù)觀念，不能以索取為參加公益活動的目的，公益活動本質(zhì)上的無償性、公益性、奉獻性應(yīng)該為我們所熟知，但當前還有不少大學(xué)生沒有徹底弄清好公益活動的性質(zhì)，以至于活動的效果和對自身素質(zhì)的提高等沒有較好的效果。

　　結(jié)論與建議：

　　參加社會公益活動，是大學(xué)生參加社會實踐活動、深入社會在任何時期都永恒不變的主題，具有重要的現(xiàn)實意義和長遠意義;作為一名大學(xué)生，如果能引導(dǎo)大學(xué)生將強烈的使命感轉(zhuǎn)化為學(xué)習(xí)、服務(wù)、實踐、奉獻等實實在在行動，把行動變?yōu)樨?zé)任，將會使大學(xué)生在人生軌跡上樹立起更高的起點。大學(xué)生的社會責(zé)任意識，應(yīng)該說不僅有助于他們較快適應(yīng)、融入社會，同時也是實現(xiàn)自我價值的必由之路;志愿者服務(wù)，將專業(yè)知識與社會需求緊密結(jié)合起來，利用專長服務(wù)社會，回報社會。參加各種公益活動，培養(yǎng)自身的社會責(zé)任感，這是一種貫穿于日常生活當中的社會實踐形式，以小見大，以細微之處見長，是進行社會實踐活動的一種長效機制�，F(xiàn)在大學(xué)生參加公益活動是一種比較普遍的形式。很多學(xué)生利用業(yè)余時間到各地去進行社會公益活動和社會考察，回校后進行認真的討論總結(jié)，用他們自己的視角來理解社會，思考未來的人生道路。所以，大學(xué)生積極參加社會公益活動，是一件非常值得和有意義的事情!

實驗報告 15

　　一、 實驗環(huán)境

　　操作系統(tǒng)：WIN7

　　編譯環(huán)境：Codeblocks13.12

　　語言：C++

　　二、 實驗?zāi)康?/strong>

　　用博弈樹算法實現(xiàn)井字棋游戲。

　　三、 實驗內(nèi)容

　　用博弈樹算法實現(xiàn)井字棋游戲。

　　井字棋游戲是一種簡單的棋類游戲，在3*3的棋盤上，兩人輪流下子，誰的棋子先連成3顆一條直線，誰就贏了，可以橫著、豎著、斜著。

　　博弈樹算法是用搜索來解決這類問題的算法，井字棋游戲步數(shù)較少，很容易用博弈樹算法實現(xiàn)AI。

　　四、 實驗步驟

　�。�1） 博弈樹搜索算法

　　博弈樹搜索算法是搜索算法的一種，用深搜來遍歷所有的下子情況，利用一種叫做MIN-MAX的策略，就是對每種棋盤情況有一個估價函數(shù)，對A方有利就是正數(shù)，對B方有利就是負數(shù)。A方行動時，必然走使棋盤的估價函數(shù)最大的那一步，也就是MAX；而B方行動時，必然走使估價函數(shù)變得最小，也就是MIN的一步。

　　博弈樹搜索時，會假設(shè)雙方都足夠聰明，每次都先試著走完所有的可能，然后讓當前行動人走對自己最有利的那一步。最后，得到AI當前所需走的這一步到底走哪步，讓AI走出這一步。

　　（2） 估價函數(shù)

　　估價函數(shù)是博弈樹算法重要的一部分。我設(shè)計的.估價函數(shù)，是某一方已經(jīng)連三了（也就是已經(jīng)勝利了），就直接返回1000或-1000。若在某一行、某一列、某一斜線（一共有三行、三列、兩條斜線），每有兩個A方的棋和一個空格，則估價+50，每有一個A方的棋和兩個空格，則估價+10；B方的也類似。

　　這樣，就能把雙方的勝負、優(yōu)劣勢情況用估價函數(shù)表示出來。

　�。�3） 數(shù)據(jù)結(jié)構(gòu)

　　沒有用太復(fù)雜的數(shù)據(jù)結(jié)構(gòu)，用結(jié)構(gòu)體中的3*3數(shù)組存儲棋盤，用vector來存儲某一情況電腦可以走的各種選擇，這樣電腦能在有多種估價函數(shù)相同的選擇的時候能隨機從中選一個。

　　五、 實驗結(jié)果

　　測試的結(jié)果：程序無論先后手都根本不會輸，玩家有失誤的話它能贏。

　　運行截圖：

　　1.開始可以選擇先后手：

　　2.我按了0，選擇了先手。電腦在對局途中都會說出我設(shè)定好的語句，來表明它用博弈樹算法得到的對局勢的分析。如我下在了中間的1,1位置，電腦用博弈樹算法，可以得知走四個角才不會輸，走其他的四個點必輸，所以如下圖進行了判斷，然后隨便選了一個角下棋。

　　3.我第三手下載了左邊中間的1,0位置，電腦能判斷出它不堵我我就贏了（出了1,2之外的位置的估價數(shù)值都為1000，也就是玩家會獲勝，所以它只有走1,2，才能避免必輸?shù)那闆r）。

　　4.我下錯了一步棋，電腦能通過博弈樹算法得知它走這一步他就贏了，然后他贏了。之后可以選擇重新開始或者退出。

　　6.玩家選擇后手的話，AI會判斷出它先手走哪步其實都不是必贏，假設(shè)玩家足夠聰明（這也是博弈樹算法的一部分，會假設(shè)雙方足夠聰明，每步都走最好的位置），AI先手走哪個位置其實都是一樣的。

　　7.玩家后手走一般要走中間，而我選擇下了一個無關(guān)的角，這是必輸?shù)淖叻ǎ�電腦可以通過博弈樹算法得知我必輸，于是它走出了必贏的一步，并且告知我輸定了。

　　8.我必須堵它，然后它又走了一步，走出了雙2，于是我輸了。

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