鉛暴露對豬免疫功能影響論文

　　【摘要】 目的 探討飼料中添加不同劑量鉛對豬免疫功能的影響。方法 將24頭14～17 kg仔豬隨機分為4組，用正常飼料和分別添加5，15，45 mg/kg(分別為低、中、高劑量組，均按含鉛量計)醋酸鉛的飼料對其進行90 d攻毒飼養(yǎng)試驗。測定豬血液中白細胞數量(wbc)、血清中免疫球蛋白(igm、 igg 、iga)、和補體(c3，c4)含量，并使用四甲基偶氮噻唑鹽(mtt)法檢測血液中t淋巴細胞活力。結果 低劑量組t淋巴細胞活力降低29.3％，與對照組比較差異有統(tǒng)計學意義(p<0．05)；中劑量組iga含量下降0.12 g／l，t淋巴細胞活力降低25.2％，與對照組比較差異均有統(tǒng)計學意義(p<0．05)；高劑量組的白細胞(wbc)．igm、igg、iga、c3含量分別下降4.3×109，1.48，0.13，0.14，0.31 g/l，t淋巴細胞活力下降37.4％，與對照組比較差異均有統(tǒng)計學意義(p<0.05)。結論 飼料中含鉛量達到5 mg／kg時影響豬免疫功能，高于45 mg／kg時可導致豬免疫力顯著降低

　　【關鍵詞】 鉛；飼料；豬；免疫功能

　　abstract： objective to study the effect of lead exposure on immune function of pigs.methods twenty-four pigs were randomly divided into four groups and were fed for 90 days with normal feeds and feeds with lead content of 5 mg/kg(low dose)，15 mg／kg(medium dose)，45 mg/kg(high dose),respectively.the number of white blood cell(wbc)and igm，igg iga，c3，c4 level in serum were measured and t lymphocyte activity was determined by mtt method.results t瞝ymphocyte activity in low瞕ose group decreased by 29.3％ compared with the control group(p<0.05).the content of iga and t瞝ymphocyte activity in the medium瞕ose group decreased by 0.12 g/l and 25.2％,respectively,compared with the control group(p<0.05).the content of wbc，igm，igg iga and c3 in high dose group decreased by 4.3×109/l，1.48 g/l，0.13 g/l，0.14 g/l，0.31 g/l,respectively.while the t瞝ylnphocvte activity was 37.4％lower than that of the control group，and all the differenes compared with the control group were statistical significant(p<0.05).conclusion the immunity of pigs could be affected by lead in feed when its content was up to 5 mg／kg,and could be signincantly dereased with the lead content above 45 mg/kg.

　　key words：lead；feed；pig；immune function

　　近年來，伴隨飼料工業(yè)的發(fā)展，為滿足畜禽快速生長需要，我國畜牧業(yè)生產過程中存在盲目向飼料中添加過多微量元素的現(xiàn)象，導致飼料中鉛超標的情況時有發(fā)生，對畜禽健康和食品安全造成潛在的危害〔1〕。Www.133229.cOm有研究表明，長期低劑量鉛暴 露可以抑制t淋巴細胞的增殖和分化〔2,3〕，并導致血清中免疫球蛋白igm，igg含量降低〔4〕。本研究觀察飼料中添加不同劑量鉛對豬免疫機能的影響，找出飼料中鉛含量與豬免疫毒性的`劑量-效應關系，為國家制定飼料中鉛含量限量標準提供理論依據。

　　1 材料與方法

　　1.1 材料與儀器 健康商品仔豬24頭，雌雄各半（陜西楊陵上河豬場)，體重14～17 kg；醋酸鉛(純西安化學試劑廠)； 胎牛血清培養(yǎng)液（dmem）（美國gibco公司)；植物凝集素（ppha-p）（美國sigma公司)；二甲基亞砜(dmso，美國sigma公司)；豬淋巴細胞分離液(天津灝洋生物制品科技責任公司)；標準胎牛血清(天津灝洋生物制品科技責任公司)；xd811l生化分析儀(上海迅達醫(yī)療儀器有限公司)；ca500三分類血液分析儀(日本埃爾瑪公司)；ckx41倒置顯微鏡(日本olympus公司)；mco-15ac二氧化碳培養(yǎng)箱(日本sanyo公司)；dg5030多孔酶標測定儀(國營華東電子管廠)。

　　1.2 分組與染毒 24頭豬隨機分為4組，每組6頭，分別為對照組和低、中、高劑量組(飼料中分別添加鉛5.0，15.0，45.0 mg／kg)。正常飼料適應性飼養(yǎng)10 d后，攻毒飼養(yǎng)持續(xù)90 d。

　　1.3 血液中白細胞數量分析 采用乙二胺四乙酸鈉(edta-na)真空采采取豬血管抗凝血，血液分析儀測定全血中白細胞數量。

　　1.4 t淋巴細胞活力測定 采用t淋巴細胞轉化試驗測定t淋巴細胞轉化率。于豬前腔靜脈采取無菌抗凝血，經豬淋巴細胞分離液分離出淋巴細胞，顯微鏡下稀釋至5×106個／ml，加入含pha-p的dmem培養(yǎng)藏100 μl(pha-p終濃度為9 μg／ml)，co2培養(yǎng)箱孵育68 h，之后加入四甲基偶氮噻唑藍(mtt 5 mg/ml)10 μl，繼續(xù)孵育4 h，加入100 μl dmso，輕微振蕩10 min，利用酶標儀在490 nm波長下測定其吸光度(a)值。用加pha-p孔的吸光度值減去不加pha-p孔的吸光度值代表淋巴細胞的活力。

　　1.5 免疫球蛋白(igm，igg，lga)和補體(c3，c4)測定 采用免疫比濁法，按照試劑盒說明操作。試劑盒(上海玉蘭生物技術有限公司)。

　　1.6 統(tǒng)計分析 采用spss 13.0軟件進行方差分析和duncan多重比較分析。

　　2 結 果

　　2.1 鉛對豬血液中白細胞數量及t淋巴細胞活力的影響(表1) 低中劑量組血液中白細胞數量較對照組略有降低，差異無統(tǒng)計學意義(p>0.05)；高劑量組血液中白細胞數量顯著低于對照組(p<0.05)。3個劑量組t淋巴細胞活力與對照組比較差異均有統(tǒng)計學意義(p<0.05)，且中劑量組t淋巴細胞活力較低劑量組略有上升,但3個攻毒組血液內t淋巴細胞活力差異無統(tǒng)計學意義(p>0.05)。 表1 鉛暴露對豬白細胞數量和t淋巴細胞活力影響注：與對照組比較，a p<0.05。

　　2.2 鉛對豬血清中免疫球蛋白及補體含量的影響(表2) 隨著飼料中鉛含量的增高，血清中免疫球蛋白數量呈下降趨勢。結果顯示，高劑量組體內igg、iga含量均顯著低于對照組(p<0.05)；中劑量組體內iga含量顯著低于對照組p<0.05)；低劑量組各類免疫球蛋白含量與對照組比較差異均無統(tǒng)計學意(p<0.05)。隨著飼料中鉛含量的增加，c3含量呈表2 鉛暴露對豬血清中免疫球蛋白和補體含量影響注：與對照組比較，a p<0.05。

　　逐步降低趨勢，且高劑量組血清中c3含量與對照組比較差異有統(tǒng)計學意義(p<0.05)，而中、低劑量組血清中c3含量與對照組之間比較差異無統(tǒng)計學意義(p>0.05)。c4含量低劑量組與高劑量組比較差異有統(tǒng)計學意義(p<0.05)。

　　3 討 論

　　t淋巴細胞轉化試驗是目前測定機體細胞免疫功能狀態(tài)的一種較好的方法，而測定血清中的igm、igg、iga、c3、c4含量則能較好地反映出機體體液免疫能力的強弱。

　　研究發(fā)現(xiàn)，飼喂含鉛飼料可導致豬體內白細胞含量降低，t淋巴細胞活力下降，免疫球蛋白與補體含量下降。說明食用含鉛飼料可以使豬免疫力降低，證明鉛具有免疫毒性，與相關報道一致〔5-8〕但也有報道表明,鉛可以促進t淋巴細胞的 增殖和分化，低濃度的鉛在體外可以激活小鼠淋巴細胞，使其dna合成增加〔9〕。本實驗發(fā)現(xiàn),中劑量組t淋巴細胞活力略高于低劑量組，但遠低于對照組。提示，鉛含量在一定范圍內或許可以小幅度提高t淋巴細胞活力，但具體作用機制還有待于進一步研究。

　　實驗結果表明，低劑量組t淋巴細胞活力測定結果與對照組比較差異有統(tǒng)計學意義，(p<0.05)，說明飼料中含鉛5 mg／kg對試驗豬免疫能力的損傷已經在少數指標上開始體現(xiàn)。高劑量組的試驗豬各免疫指標與對照組相比急劇降低，其中wbc、igg 、iga、c3與對照組比較差異有統(tǒng)計學意義（p<0.01)，說明飼料中鉛含量達到45 mg／kg己經對豬免疫力造成極嚴重影響，與成軍〔10〕等研究結果部分相似。

　　【參考文獻】

　　1〕 何進，黃逸紅.飼料中鉛、鎘含 量超標的危害與對策［j］.飼料博覽，2006，(5)：45-47.

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　　〔3〕 趙劍，蔡原，譚成森，等.鉛和乙醇對雄性小鼠細胞免疫功能影響［j］.中國公共衛(wèi)生，2006，22(1)：52-53.

　　〔4〕 sarasua sm，vogt rf,henderson lo，et al.serum immunoglobulins and lymphocyte subset distributions in children and adults living in communities assessed for lead and cadmium exposure［j］.journal of toxicoloy and environmental health,2000,60(1)：1-15.

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　　〔6〕 lee je，naqi sa，kao e，et al.embryonic exposure to lead：comparison of immune and cellular responses in unchallenged and virally stressed chickens［j］.arch toxicol，2002，75(11-12)：717-724.